• <strong id="qyake"></strong>
  • <sup id="qyake"><object id="qyake"></object></sup>
    <strong id="qyake"></strong>
  • <strong id="qyake"></strong>
  • <sup id="qyake"><button id="qyake"></button></sup>
  • <strong id="qyake"></strong>
  • <strong id="qyake"><object id="qyake"></object></strong>
  • <sup id="qyake"><button id="qyake"></button></sup>
    <optgroup id="qyake"></optgroup>
  • <strong id="qyake"></strong>
    產品分類

    您的位置:首頁 > 技術文章 > mRNA生物制品質量控制家族成員全新亮相

    技術文章

    mRNA生物制品質量控制家族成員全新亮相

    更新時間:2023-10-08 瀏覽次數:2058

    mRNA藥物是通過將編碼抗原蛋白的mRNA接種到人體,利用人體細胞內的遺傳物質進行表達合成抗原蛋白,通過抗原蛋白誘導和激活機體的免疫系統產生免疫反應,從而達到預防和治療疾病的目的。

     

    由于其具有較低的感染和突變風險,能夠同時誘導產生體液免疫和細胞免疫,免疫效能好,研發和生產周期短,容易實現量產等特點,目前被廣泛用于傳染性疾病、腫瘤及罕見病藥物的研發。

     

    通過酶促體外轉錄法制備大量mRNA的工藝已經成熟,其中規?;a過程中主要涉及的工具酶有T7 RNA Polymerase、DNase Ⅰ、RNase Inhibitor、無機焦磷酸酶等,這些酶的靈活使用極大的方便了生產流程,加速科學家們研究進展。

     


    01
    mRNA規?;a中的工具酶
     
    N1
     
    T7 RNA Polymerase

    T7 RNA聚合酶是由T7噬菌體DNA編碼的,一種DNA依賴性的RNA聚合酶,具有高度啟動子專一性,可催化以T7啟動子序列為起點 5’→ 3’方向的RNA合成,在mRNA藥物研發中常以其催化目的基因的體外合成,轉錄效率和產量高,市面上由其催化的1μg DNA模板可轉錄出150-200μg的RNA。

     

    N2
     
    DNase I

    脫氧核糖核酸酶I,是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內切酶,可以用于各種RNA樣品的處理,消化由T7 RNA聚合酶催化的體外轉錄后的DNA模板,65℃加熱10分鐘可使DNaseI失活。

     

    N3
     
    RNase Inhibitor

    RNase(Ribonuclease,核糖核酸酶)是一類能夠催化RNA降解為小分子RNA的核酸酶,廣泛存在于真核、原核生物的所有細胞和組織中,通常有強活性,RNA樣本中微量的RNase污染足以導致其降解。為了減少RNA的損失,適當添加RNase抑制劑(RNase inhibitor)是有必要的。

     

    RNase抑制劑是人的胎盤中存在的一種特異性核糖核酸酶(RNase)抑制劑,能夠特異地與RNase以非共價鍵結合形成復合體從而使RNase失活。

     

    N4
     
    無機焦磷酸酶

    多種代謝反應會產生無機焦磷酸,Pyrophosphatas無機焦磷酸酶(PPase)可水解無機焦磷酸鹽,可以避免無機焦磷酸對反應的抑制,并且提供熱力學動力促使反應向正向進行,從而常用于RNA體外轉錄、DNA復制和擴增如HDA或LAMP等溫擴增等。

     

    尤其在工業化生產mRNA疫苗的時候會產生大量的無機焦磷酸鹽,為了保證mRNA疫苗高效生產,可以添加無機焦磷酸酶,解除生成的無機焦磷酸鹽對反應體系的抑制。

     

     
    dsRNA
     

    添加相關工具酶還會帶來其他影響,例如使用 T7 RNA 聚合酶合成RNA的技術目前已經很成熟,但之前的研究已經確定了體外合成過程中某些副產物的存在,這些副產物會觸發細胞免疫反應,包括雙鏈 RNA (dsRNA),這已被證明成為免疫通路的主要觸發。

     

    02
    檢測mRNA生物制品中殘留的必要
     

    大多數工具酶的使用能幫助我們獲得大量的RNA,但工具酶本身對于藥物成品來說亦是一種雜質,這些雜質與mRNA一起通過LNP包封進入細胞釋放后,極有可能產生高強度的免疫原性從而連帶引發mRNA的降解。以及產生的雙鏈RNA (dsRNA)雜質具有潛在的免疫原性,對患者有害。因此,mRNA相關制品需要測定和控制工具酶和dsRNA的含量。

     

    03
    相關法規要求與檢測方法
     

    ——mRNA類的質量標準可以納入外觀、pH值、含量、鑒別、序列分析、mRNA完整性、加帽率、poly( A)長度及分布、生物學活性、無菌檢測、細菌內毒素、雙鏈 RNA殘留、溶劑殘留等檢測項目。

     

    體外基因修飾系統藥學研究與評價技術知道原則(試行)

    --2022年05月

     

    ——mRNA等通過體外轉錄方式制備的核酸產品,可通過對原材料、轉錄模板和轉錄條件的研究,控制轉錄產物的質量。轉錄用的重要原材料,如核苷酸、修飾核苷酸、 5’-帽或類似物、工具酶(如轉錄酶等)等應進行適當的質量控制,可關注其純度和雜質,轉錄酶還需關注其保真度等。

     

    轉錄模板的制備應能確保模板的序列準確性和純度,減少雜質殘留。體外轉錄條件應經過充分的研究,提高轉錄序列的準確性、均一性和完整性, 減少副反應產物,如不完整 RNA、雙鏈RNA、截短RNA、長鏈RNA等的形成。

     

    體內基因修飾系統藥學研究與評價技術指導原則(試行)

    --2022年05月

     

    CDE發布的指導原則《病毒預防用mRNA疫苗藥學研究技術指導原則(試行)》以及美國藥典(USP)發布的《mRNA疫苗質量分析方法》的指南草案中(見下圖)指出:需要對整個工藝進行質量控制,保證質量有效、安全可控。

     

    其指導原則中還規定,需要對其生產工藝相關雜質進行檢測,對主要雜質進行監測與分析,需要更強大的評估方法來確保最終產品的質量和安全。其中對T7 RNA和dsRNA的殘留進行了明確規定。

     

    疫苗行業

     

    美國藥典(USP)發布的《mRNA疫苗質量分析方法》指南草案

     

    由于mRNA技術的應用相對較新,在藥物研發和制造過程中指導mRNA質量研究與控制方面的監管指南和行業標準仍在不斷發展。

     

    04
    BlueKit產品信息


    微信截圖_20231008165434.png

     

    廣州東銳科技有限公司現為譜新生物代理商,歡迎來詢!



    在線客服
    返回頂部
    精品人无码一区二区三区|国产精品臀控福利在线观看|一区二区三区精品视频日本|51精品免费视频国产专区
  • <strong id="qyake"></strong>
  • <sup id="qyake"><object id="qyake"></object></sup>
    <strong id="qyake"></strong>
  • <strong id="qyake"></strong>
  • <sup id="qyake"><button id="qyake"></button></sup>
  • <strong id="qyake"></strong>
  • <strong id="qyake"><object id="qyake"></object></strong>
  • <sup id="qyake"><button id="qyake"></button></sup>
    <optgroup id="qyake"></optgroup>
  • <strong id="qyake"></strong>